rtes-30usm : Pengklonan Menerusi PCR Himpunan, Ekspresi Dan Penilaian Penggunaannya Dalam Ujian IgG4-Elisa Bagi Mengesan Jangkitan Toksokara
Loading...
Date
2008-10
Authors
CHE AZMI, NORHAIDA
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
T'lksokariasis pada manusia adalah penyakit zoonotik yang disebabkan oleh
jangkitan helmin Toxocara canis (T. canis) yang kebanyakannya berpunca daripada
anjing dan T. cali daripada kucing. Sehingga kini, diagnosis makmal bagi jangkitan
toksokara sangat bergantung kepada ujian serologi. Ini kerana ujian secara klinikal
tidak cukup untuk membuktikan bahawa seseorang itu dijangkiti Toksokara.
Walaupun terdapat banyak kit komersial di pasaran, namun kebanyakannya
mempunyai tahap spesifisiti yang kurang memuaskan apabi/a digunakan di negara
tropika seperti Malaysia. Ini kerana penduduk di negara tropika sering mengalami
jangkitan bersama ("co-infection") daripada pelbagai helmin lain. Dalam usaha
meningkatkan tahap spesifisiti bagi ujian diagnosis toksokariasis, satu pembangunan
ujian asai untaian enzim imunosorben secara tak-Iangsung IgG4 (lgG4-EUSA)
dilakukan melibatkan penggunaan antigen rekombinan TES::30USM (rTES-30USM).
Kajian dimulakan dengan gen TES-30 diklonkan menggunakan kaedah PCR
himpunan dan ditransformasi ke dalam vektor pengklonan. Setelah itu, gen TES-30
disubklonkan ke dalam vektor ekspresi prokariot yang mengandungi tapak
perlekatan 6xHis (his-tag). Seterusnya, proses penghasilan protein dilakukan dengan
mengkultur bakteria rekombinan TES-30USM di bawah aruhan 1 mM isopropil-B-Dtiogalaktopiranosida
(lPTG) pada suhu 30'C. Protein terhasil ditulen menggunakan
resin nikel (Ni-NTA) melalui kaedah kromatografi afiniti. Antigenisiti rTES-30USM ini
kemudiannya diuji menggunakan kaedah blot Western. Setelah itu, antigen rTES-
30USM tulen yang diperolehi diaplikasi menggunakan teknik IgG4-EUSA dan nilai
spesifisiti dan sensitiviti ujian dinilai dengan membandingkannya dengan ujian kit
komersil Toxocara /gG-EIA (Cypress Diagnostic, Belgium). Asai IgG4 digunapakai
kerana kajian terdahulu telah menunjukkan ujian berasaskan subkelas antibodi IgG
ini dapat meningkatkan spesifisiti ujian serologi bagi toksokariasis. Kajian penilaian
terhadap rTES-30USM tersebut melibatkan sejumlah 338 sam pel serum yang
merangkumi 26 kes positif benar toksokariasis di mana pesakit menunjukkan tanda
dan simptom toksokariasis. Serum ini juga memberikan bacaan titer antibodi antito"
sokara yang tinggi. Selain itu, ujian turut dilakukan terhadap 115 sampel serum
daripada pelbagai jangkitan parasit lain iaitu 35 sampel pesakit helmin tularan tanah,
31 sampel pesakit amoebiasis, 20 serum pesakit toksoplasmosis, 28 serum filarasis
brugia, satu serum gnathostomiasis dan 197 serum daripada penderma darah
normal sebagai kawalan negatif.
Description
Keywords
rtes-30usm : Pengklonan Menerusi PCR Himpunan, Ekspresi Dan Penilaian Penggunaannya , Dalam Ujian IgG4-Elisa Bagi Mengesan Jangkitan Toksokara