rtes-30usm : Pengklonan Menerusi PCR Himpunan, Ekspresi Dan Penilaian Penggunaannya Dalam Ujian IgG4-Elisa Bagi Mengesan Jangkitan Toksokara

Loading...
Thumbnail Image
Date
2008-10
Authors
CHE AZMI, NORHAIDA
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
T'lksokariasis pada manusia adalah penyakit zoonotik yang disebabkan oleh jangkitan helmin Toxocara canis (T. canis) yang kebanyakannya berpunca daripada anjing dan T. cali daripada kucing. Sehingga kini, diagnosis makmal bagi jangkitan toksokara sangat bergantung kepada ujian serologi. Ini kerana ujian secara klinikal tidak cukup untuk membuktikan bahawa seseorang itu dijangkiti Toksokara. Walaupun terdapat banyak kit komersial di pasaran, namun kebanyakannya mempunyai tahap spesifisiti yang kurang memuaskan apabi/a digunakan di negara tropika seperti Malaysia. Ini kerana penduduk di negara tropika sering mengalami jangkitan bersama ("co-infection") daripada pelbagai helmin lain. Dalam usaha meningkatkan tahap spesifisiti bagi ujian diagnosis toksokariasis, satu pembangunan ujian asai untaian enzim imunosorben secara tak-Iangsung IgG4 (lgG4-EUSA) dilakukan melibatkan penggunaan antigen rekombinan TES::30USM (rTES-30USM). Kajian dimulakan dengan gen TES-30 diklonkan menggunakan kaedah PCR himpunan dan ditransformasi ke dalam vektor pengklonan. Setelah itu, gen TES-30 disubklonkan ke dalam vektor ekspresi prokariot yang mengandungi tapak perlekatan 6xHis (his-tag). Seterusnya, proses penghasilan protein dilakukan dengan mengkultur bakteria rekombinan TES-30USM di bawah aruhan 1 mM isopropil-B-Dtiogalaktopiranosida (lPTG) pada suhu 30'C. Protein terhasil ditulen menggunakan resin nikel (Ni-NTA) melalui kaedah kromatografi afiniti. Antigenisiti rTES-30USM ini kemudiannya diuji menggunakan kaedah blot Western. Setelah itu, antigen rTES- 30USM tulen yang diperolehi diaplikasi menggunakan teknik IgG4-EUSA dan nilai spesifisiti dan sensitiviti ujian dinilai dengan membandingkannya dengan ujian kit komersil Toxocara /gG-EIA (Cypress Diagnostic, Belgium). Asai IgG4 digunapakai kerana kajian terdahulu telah menunjukkan ujian berasaskan subkelas antibodi IgG ini dapat meningkatkan spesifisiti ujian serologi bagi toksokariasis. Kajian penilaian terhadap rTES-30USM tersebut melibatkan sejumlah 338 sam pel serum yang merangkumi 26 kes positif benar toksokariasis di mana pesakit menunjukkan tanda dan simptom toksokariasis. Serum ini juga memberikan bacaan titer antibodi antito" sokara yang tinggi. Selain itu, ujian turut dilakukan terhadap 115 sampel serum daripada pelbagai jangkitan parasit lain iaitu 35 sampel pesakit helmin tularan tanah, 31 sampel pesakit amoebiasis, 20 serum pesakit toksoplasmosis, 28 serum filarasis brugia, satu serum gnathostomiasis dan 197 serum daripada penderma darah normal sebagai kawalan negatif.
Description
Keywords
rtes-30usm : Pengklonan Menerusi PCR Himpunan, Ekspresi Dan Penilaian Penggunaannya , Dalam Ujian IgG4-Elisa Bagi Mengesan Jangkitan Toksokara
Citation