Pemencilan Dan Pencirian Plasmid Ph100 Daripada Bacillus thuringiensis var. galleriae
Loading...
Date
1998-05
Authors
PERERA, DAVID
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Satu kajian pemencilan dan pencman plasmid daripada Bacillus
thuringiensis var. galleriae telah dilakukan. Profil plasmid strain tersebut seperti yang
ditentukan oleh elektroforesis gel agarosa telah menunjukkan kemungkinan tiga plasmid
yang hadir. Berdasarkan kepada gerakan relatif atas gel apabila dibandingkan dengan
petunjuk saiz yang digunakan, ketiga-tigajalur DNA dilabelkan sebagai pHlOO, pH200
dan pH300 masing-masing. Peta pembatasan bagi pHlOO telah ditentukan. Sejumlah
21 enzim pembatasan telah digunakan dan keputusan menunjukkan bahawa pHlOO
mempunyai tapak tunggal untuk enzim-enzim pembatasan Hind III, Hpa II, Nde I dan
Sal1. Terdapat tiga tapak masing-masing untuk enzim Hind III dan Nde I dan satu
tapak masing-masing untuk enzim Hpa II dan Sal 1. Tidak terdapat tapak pembatasan
yang ketara untuk enzim-enzim BamH I, Bel I, Bgi I, BstB I, EcaR I, EcaR V, Hinf 1
Kpn I, Msp I, Pst I, Pvu I, Pvu II, Sma I, Sph I, Ssp I, Xba I dan Xha 1. Saiz pHlOO
ditentukan sebagai 8.2 kb. Peta pembatasan untuk dua orientasi yang mungkin telah
dibentuk. Satu vektor plasmid, pDPlOI, telah dibentuk yang membawa gen
kerintangan kloramfenikol dan kekurangan tapak replikasi yang boleh berfungsi di
dalam satu sistem Bacillus yang gram positif. Vektor ini digunakan untuk memencilkan
tapak replikasi pHI 00 daripada satu perpustakaan yang dibentuk dalam Escherichia cali
DH5a yang mengandungi fragmen-fragmen rawak pHlOO yang telah dibatas dengan
Sau3 A. Satu plasmid rekombinan, pORI, telah diperolehi selepas pemilihan dalam
Bacillus subtilis 4056. Plasmid pORI membawa satu fragmen Sau3 A bersaiz 2 kb
yang terselit di dalam tapak BamH I plasmid pDPIOl. Transformasi B. thuringiensis
var. galleriae dengan B. subtilis 4056 melalui satu kaedah pengaWanan telah
menghasilkan satu transkonjugan yang mempunyai profil plasmid yang sarna dengan B.
thuringiensis var. galleriae tetapi dengan tambahan satu jalur plasmid. Analisa
Southern dengan menngunakan fragmen Sau3 A bersaiz 2 kb tersebut sebagai prob
telah menunjukkan bahawa ia mengenali pH 100 dan fragmen 2.3 dan 5.1 kb pHlOO
yang dibatas dengan Hind III. Maka telah disimpulkan bahawa fragmen 2 kb tersebut
membawa tapak permulaan replikasi untuk pHlOO.
Description
Keywords
Pemencilan Dan Pencirian Plasmid Ph100 Daripada , Bacillus thuringiensis var. galleriae