Penulenan dan pencirian enzim a-amilase daripada Aspergillus flavus serta amplifikasi cDNA gen a-amilase dengan tindakbalas ra
| dc.contributor.author | Khoo, Siew Ling | |
| dc.date.accessioned | 2016-10-28T01:42:13Z | |
| dc.date.available | 2016-10-28T01:42:13Z | |
| dc.date.issued | 1995-03 | |
| dc.description.abstract | Aspergillus flavus (Link) menghasilkan lebih kurang 50 U/ml aktiviti amilolisis apabila dikulturkan dalam medium cecair yang mengandungi kanji ubi kayu gred rendah sebagai substrat. Analisis secmoa elektroforesis turasan kultur te1ah mempamerkan kehadiran satu jenis enzim amilase melalui pewarnaan zimogram gel poliakrilamidao Enzim amilolisis tersebut telah dikenalpastikan sebagai. a-amilase apabila ia menyebabkan (i) penurunan nilai biru kanji yang pesat dan (ii) penghasilan satu eampuran hasil hidrolisis kanji yang terdiri daripada glukosa, maltosa, maltotriosa dan maltotetriosa. a-Amilase tersebut ditulenkan melalui pemendakan ammonium sulfat dan kromatografi penukaran ion dan didapati bersifat homogen dalam gel poliakrilamida-sodium dodesil sulfat. , Enzim a-amilase tulen didapati mempunyai berat molekul di sekitar 53 kD dengan titik isoelektrik pada pH 3.42. Enzim tersebut menunjukkan aktiviti maksimum pada pH 6.0 danstabil dalam julat pH 5.0 - 8.5. Suhu optimum enzim adalah 55°C dengan kestabilan krmaJ selama salU jam sehingga 50uC. Nilai Kill dan V maks untuk kanji ubi kayu masak adalah 0.5 gil dan 109 umol gula penurun per mg protein per min. Aktiviti amilase digalakkan oleh ion Ca2 • manakala AgT dan Hg2T pula merupakan perencat yang mujarab. eDNA amilase telah diamplitikasikan secara tindakbalas rantai polimerase dengan menggunakan oligonukleotida penghujung 5' yang mewakiJi jujukan peptida penghujung-N dan satu kombinasi oligo(dT) dengan tambahan dua bes pada penghujung 3'nya sebagai primer. Oligo(dT)-oligo(dT) tcrsebut dikumpulkan kepada 3 golongan secara rawak. Amplifikasi telah dilakukan dengan beberapa suhu penyepuhan primer. Akan tetapi, keputusan hanya dapat diperhatikan dengan suhu penyepuhan pada 3rc. Ketiga-tiga golongan memberikan jalur tunggal DNA yang jelas yang mana satu daripadanya adalah lebih keeil sedikit. Ketiga-tiga jalur terscbut dinyalakan apabila penghibridan Southern hasil-hasil al11plifikasi dengan jujukan peptida bahagian tengah dilakukan. Darjah ketegangan penghibridan sudah meneukupi untuk mengelakkan sebarang pengikatan tak spesifik di mana tiada jalur DNA penanda saiz pOEM yar1g juga tersekatgerakkan di atas l11embran nylon yang sama dinyalakan. Maka, kita dapat menyimpulkan bahawa suatu eDNA amilase A . ./Zavus telah dial11plifikasikan. Memandangkan terdapat pcrbezaan saiz dalam hasil-hasil yang leramplifikasi, penghibridan Southern DNA ~enom dengan prob oligonukleotida yang mewakili jujukan peptida bahagian tengah telah dilakukan seem·a berasingan. Beberapa. jalur telah dinyalakan menunjukkan bahawa kel11ungkinan terdapat lebih daripada satu gen amilase dalam A. jlavus. | en_US |
| dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/123456789/2912 | |
| dc.subject | Aspergillus flavus menghasilkan lebih kurang 50 U/ml aktiviti amilolisis | en_US |
| dc.subject | apabila dikulturkan dalam medium cecair yang mengandungi kanji ubi kayu gred rendah | en_US |
| dc.title | Penulenan dan pencirian enzim a-amilase daripada Aspergillus flavus serta amplifikasi cDNA gen a-amilase dengan tindakbalas ra | en_US |
| dc.type | Thesis | en_US |
Files
License bundle
1 - 1 of 1
Loading...
- Name:
- license.txt
- Size:
- 1.71 KB
- Format:
- Item-specific license agreed upon to submission
- Description: